北京諾博萊德科技有限公司

BCA蛋白濃度測定試劑盒使用說明

本試劑盒自訂購之日起一年內有效。本試劑盒用于酶標板或者200ul比色皿時可做500孔。當使用2ml比色皿時可做50孔，如果是1ml比色皿時可做100孔。

產品簡介

堿性條件下，蛋白將Cu2+還原為Cu+， Cu+與BCA試劑形成紫顏色的絡合物，測定其在562nm處的吸收值，并與標準曲線對比，即可計算待測蛋白的濃度。常用濃度的去垢劑SDS，Triton X-100，Tween不影響檢測結果，但受螯合劑(EDTA，EGTA)、還原劑（DTT，巰基乙醇）和脂類的影響。實驗中，若發現樣品稀釋液或裂解液本身背景值較高，可試用Bradford蛋白濃度測定試劑盒。

使用說明

一，微孔酶標儀法

1.         配制工作液: 根據標準品和樣品數量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻(混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內穩定。

2.         稀釋標準品：取10微升BSA標準品用PBS稀釋至100微升（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。將標準品按0, 2, 4，6，8, 12, 16, 20微升加到96孔板的蛋白標準品孔中，加PBS補足到20微升。

3.         將樣品作適當稀釋（多做幾個梯度，如作2倍、4倍、8倍稀釋），加20微升到96孔板的樣品孔中。由于移液器在取小量時的誤差，標準線前面的點可能不很準確，所以盡可能的讓樣品點落在標準線1/2后。

4.         各孔加入200微升BCA工作液，37℃放置15-30分鐘。用酶標儀測定A562nm，根據標準曲線計算出蛋白濃度。使用溫箱孵育時，應注意防止因水分蒸發影響檢測結果。

 二，分光光度計法

如沒有酶標儀，可用分光光度計在離心管中混勻后加入比色皿中比色。

步驟如下：

1．配制工作液: 根據標準品和樣品數量，按50體積BCA試劑加1體積Cu試劑（50:1）配制成BCA工作液，充分混勻(混合時可能會有渾濁，但混勻后就會消失)。BCA工作液室溫24小時內穩定。

2，  稀釋標準品：取100微升BSA標準品用PBS稀釋至1ml（樣品一般可用PBS稀釋），使終濃度為0.5mg/ml。

3，  取八支（或者更多）5ml離心管，標讓號，按下表加入試劑。

4，  37℃放置15-30分鐘。用分光光度計測562nm處吸光值，根據標準曲線計算出蛋白濃度。